miércoles, 23 de septiembre de 2009

TINCIÓN DE GRAM

Tiene su origen en el año 1884 con el científico Hans Christian Gram. Es un método de tinción que se usa para identificar bacterias de acuerdo a sus diferencias en su pared celular. Cuando la pared celular es gruesa y sana se denomina Gram positiva y cuando la pared es delgada y dañada se denomina Gram negativa. Esta diferencia se logra gracias a la reacción con el ácido peptidoglucano o mureína.
La tinción de Gram tiene teorías que la han desarrollado y perfeccionado.
· Steam y Steam en 1923, los cuales hablan de la combinación química de los colorantes y las proteínas.
· Gianni en 1952, propone un proceso que lo determina como inversión de la reacción.
· Libenson y Mcllroy plantean los factores que intervienen en la coloración.
La tinción de Gram se usa para la identificación de bacterias, para determinar la utilidad y control de la calidad de las bacterias y para determinar la importancia de la calidad.
Con la tinción de Gram se identifican diferentes formas de bacterias como: cocos, bacilos espirilos (rígidos), espiroquetas (blandos), vibriones (en forma de coma).
Técnica de la tinción de Gram:
-Recoger muestra estéril

- Hacer el extendido en espiral
- Dejar secar a temperatura ambiente
- Fijar la muestra al calor (flamenado 3 veces aprox.)
- Agregar cristal violeta al y esperar 1 minuto. Este tinte dejará de color morado las bacterias Gram positivas.
- Enjuagar con agua corriente. *
- Agregar lugol y esperar 1 minuto.
- Enjuagar con agua corriente.
- Agregar alcohol y acetona por goteo y esperar 15 segundos.
- Enjuagar con agua.
- Agregar safranina y esperar 30 segundos. Este tinte dejará de color rosado las bacterias Gram negativas.
- Enjuagar con agua.
- Chorro suave ya sea con piseta o directo de la llave
- Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.

BIBLIOGRAFIA
- Forbes, B.A., Sahm D. F. Weissfeld A.S. 1993 Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 506 pp- Schlegel, H. G.. 1997. “Microbiología general” 9. ed. Barcelona : Omega, 654pp
http://www.ciencias.uma.es/publicaciones/encuentros/ENCUENTROS62/metodo.html http://edicion-micro.usal.es/web/educativo/micro2/tema01.html - http://www.rnw.nl/informarn/html/cienciapenicilina990902.html

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